dna的提取后鑒定準則有哪些
回答 共1條回答
廈門親子鑒定中心
廈門親子鑒定中心位于廈門市湖里區(qū)嘉禾路618號二樓209（廈門國權基因），提前咨詢預約。
1.純度檢測：識別雜質干擾
DNA純度直接影響后續(xù)實驗（如PCR、測序）的成敗。常用方法包括：
紫外分光光度法：通過260nm（DNA吸收峰）與280nm（蛋白質吸收峰）的吸光度比值（A260/A280）評估純度。理想比值為1.8-2.0，低于1.8表明存在蛋白質污染，需重新純化。
熒光定量法：使用熒光染料（如PicoGreen）特異性結合DNA，避免蛋白質或RNA的干擾，適合微量樣本。
2.濃度測定：確保足量DNA
DNA濃度不足可能導致擴增失敗，過高則可能抑制反應。
熒光定量法：高精度測定DNA濃度，尤其適用于法醫(yī)微量樣本（如煙頭、指紋殘留物）。
紫外分光光度法：快速估算濃度（A260值為1對應約50μg/mL雙鏈DNA），但易受雜質影響。
3.完整性評估：驗證DNA結構
DNA鏈的完整性對長片段擴增（如全基因組測序）至關重要。
瓊脂糖凝膠電泳：通過電泳條帶判斷DNA片段大小。完整基因組DNA應顯示單一高分子量條帶；若出現拖尾或彌散，提示降解。
微流控芯片分析：自動化檢測DNA片段分布，適用于高通量實驗室。
4.污染控制：杜絕交叉污染
污染可能導致假陽性或假陰性結果，需嚴格管控：
空白對照設置：提取過程中加入不含DNA的空白樣本，監(jiān)測試劑或操作污染。
分區(qū)分時操作：將樣本處理、PCR擴增和測序區(qū)域物理隔離，避免氣溶膠污染。
重復實驗驗證：對關鍵樣本（如法醫(yī)物證）進行多次提取和擴增，確保結果一致性。
5.功能性驗證：確認DNA可用性
純度、濃度達標后，需通過實際應用驗證DNA功能：
PCR擴增：針對目標區(qū)域（如STR位點）進行擴增，檢測是否成功。失敗可能提示抑制劑殘留或DNA降解。
測序分析：通過二代測序（NGS）直接讀取堿基序列，驗證DNA模板質量，精度需達99.99%。
6.特殊樣本的額外要求
微量/降解樣本：需增加擴增循環(huán)數或采用全基因組擴增技術。
古DNA樣本：需檢測天冬氨酸外消旋化率以評估保存狀態(tài)，并使用超凈工作臺防止外源污染。
總結
DNA提取后的鑒定標準是科學研究的“質量門控”，涉及理化性質檢測、污染防控及功能性驗證。這些標準在法醫(yī)學、親子鑒定和古DNA研究中尤為重要，確保結果的可信度與可重復性。隨著技術進步（如單分子測序），鑒定方法將更趨精準，但嚴謹的標準化操作始終是科學真相的基石。
